| Дипломная работа Эпизоотологическая ситуация и меры профилактика бешенства в Симферопольском районе АР Крым 2006 |
 |
 |
| Животноводство - Дипломы по животнводству |
|
Страница 6 из 13
1.7 ПАТАЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ При вскрытии трупов животных, павших от бешенства, специфических для данного заболевания признаков не обнаруживают. При наружном осмотре трупа наблюдаются: цианоз видимых слизистых оболочек, повреждения губ, языка, зубов и др., в отдельных случаях — пониженная упитанность. При вскрытии обнаруживают: наполнение сосудов кожи и подкожной клетчатки; кровь темная, густая, плохо свернута; мышцы темно-красные. Желудок часто пустой или содержит различные инородные тела; слизистая оболочка желудка почти всегда сильно гиперемирована, отечна, покрыта слизью, нередко с кровоизлияниями округлой формы и различной величины, расположенными на вершине складок, преимущественно в области дна и пилоруса. Такие же изменения находят в кишечнике. Печень, почки и селезенка гиперемированы, поджелудочная железа без видимых изменении. Мочевой пузырь наполнен мутноватой мочой. Слизистая оболочка дыхательных путей покрыта слизью и незначительно гиперемирована. Легкие гиперемированы. Сердце увеличено, мускулатура его серовато-красного цвета. Для крупных животных характерны множественные кровоизлияния в слизистые оболочки, под серозную оболочку органов грудной и брюшной полости, в подкожную клетчатку и мышечные фасции. В ЦНС обнаруживают наиболее резко выраженные изменения — гиперемию, расширение сосудов, отечность мозга и его оболочек, очень мелкие точечные кровоизлияния. Оболочки мозга утолщены и гиперемированы. При наличии соответствующих патологоанатомических изменений не должно исключаться проведение лабораторных исследований, в особенности, если при жизни наблюдалась соответствующая клиническая картина. Вскрывать трупы необходимо с соблюдением мер личной профилактики. 1.8 ДИАГНОЗ Диагноз на бешенство устанавливают на основании: 1) эпизоотической обстановки (местность, неблагополучная по данному заболеванию); 2) клинической картины (внезапное изменение поведения животного, повышенная рефлекторная возбудимость, извращение аппетита, параличи мышц нижней челюсти, глотки и гортани, задних конечностей); 3) данных патологоанатомического вскрытия (инородные тела и кровоизлияния в желудочно-кишечном тракте, изменения в ЦНС); 4) результатов лабораторного исследования патологического материала [2,13]. 1.8.1 ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ В лабораторию направляют трупы животных, а от крупных животных — голову или головной мозг. Одновременно с патологическим материалом в лабораторию должны быть посланы: сопроводительное письмо, копия истории болезни и копия акта вскрытия, если направляются голова или мозг. В лаборатории, соблюдая меры личной профилактики (очки, марлевая повязка на нижнюю часть лица, перчатки), вскрывают черепную полость, делают посев на питательные среды для контроля на наличие бактериального загрязнения. После этого головной мозг извлекают из черепной полости. Часть извлеченного мозга помещают на холод в 50%-ном глицерине на буферном или физиологическом растворе на случай необходимости повторного исследования. Материал для исследований берут из области аммоновых рогов, коры полушарий, мозжечка и продолговатого мозга. Решающее значение имеют результаты лабораторных исследований. Для постановки точного диагноза важно придерживаться правил отбора патматериала и его транспортировки в лабораторию (голова или труп животного нужно хранить на холоде). J. Barrat разработал альтернативный метод отбора образцов головного мозга без рассечения черепа. С этой целью, применяется пластиковая трубочка 0,5 мм, ее вводят в большое затылочное отверстие и вынимают мозговую ткань, которую помещают в полистироловую пробирку с консервантом. Этот метод можно использовать при проведении мониторинговых исследований, отборе патматериала в полевых условиях и в жаркое время года. Невзирая на прогресс в диагностике бешенства, метод флуоресцирующих антител (МФА) и биопроба на мышах является основной для традиционной диагностики болезни. МФА является быстрым и доступным методом, применяется в 96% стран мира, в том числе и в Украине. Важным условием является качество диагностикума. Для повышения специфичности МФА необходимо, использовать коньюгаты с моноклональными рабическими антителами. Выделение вируса у мышей является обязательным и самым чувствительным референс-тестом, но он имеет ряд недостатков. Одним из них есть длительность исследования. На сегодня разработаны методы изоляции полевых штаммов вируса бешенства в культуре клеток, которые широко используются для его диагностики. Эти методы являются более перспективными и позволяют выделить вирус через 24—48 часов вместо 5—28 суток. Самой чувствительной культурой клеток для выделения уличного вируса бешенству являются нейробластома мыши. Однако этот метод дорог и нуждается в соответствующем оборудовании и материалах, то есть надлежащей материально-технической базы. Во многих странах мира все шире внедряется твёрдофазный иммуноферментный анализ (ТФ — ИФА) для диагностики бешенства. Однако при исследовании свежего патматериала по чувствительности он уступает биопробе. Наиболее чувствительными тестами идентификации вируса бешенства являются методы, основой которых является выявление РНК—дот-гибридизация, полимеразная цепная реакция, которые в основном используются в научных исследованиях для штаммовой дифференциации вируса бешенства [24]. 1.8.1.1 ПАТОЛОГОГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Состоит в основном из микроскопических исследований, постановки биологических проб и серологических реакций. При микроскопическом исследовании материала наиболее характерные изменения находят в ЦНС— это картина рассеянного негнойного энцефалита. Изменения в ЦНС можно подразделить на: 1) изменения сосудисто-воспалительного характера в кровеносных сосудах (гиперемия, выпотевание серозного экссудата, миграция лейкоцитов и диапедез эритроцитов); 2) дегенеративные изменения нервных клеток (хроматолиз, набухание, дегенерация и некроз); 3) образование различного рода узелков и включений, а именно: узелков Б. Бабеша, ацидофильных зернышек, телец-включений Бабеша — Негри. Эти включения чаще находят в клетках аммонова рога. Их можно обнаружить в нервных клетках других отделов ЦНС: в коре полушарий, мозжечке, продолговатом мозге и, реже, спинном мозге, а также в ганглиях блуждающего нерва и межпозвоночных ганглиях. Поэтому наряду с аммоновым рогом необходимо исследовать и другие отделы ЦНС, в первую очередь мозжечок и продолговатый мозг. Включения находили также в цитоплазме клеток нервных узлов, расположенных в соединительной ткани слюнных желёз. Микроскопические исследования гистологических срезов или мазков отпечатков, приготовленных из различных отделов головного мозга, производят на обнаружение телец Бабеша--Негри. Для этого применяют различные методы окраски: по Романовскому — Гимза, Трубиной, Туревичу, Селлеру, Муромцеву, Михину, Манну и др. В отпечатках мозга, окрашенных по Муромцеву или Селлеру, включения могут быть обнаружены в течение нескольких часов. В нервных клетках головного мозга, особенно часто у кошек, обнаруживают неспецифические включения, которые очень трудно отличить от телец Бабеша—Негри. Поэтому в сомнительных случаях необходимо использовать биопробу пли серологические реакции. Если в исследуемом материале не обнаруживают телец Бабеша—Негри, то требуется постановка биологической пробы путем интрацеребрального заражения подопытных животных (мышей, кроликов, преимущественно молодого возраста) 10% - ной суспензией из головного мозга. Исход заражения подопытных животных учитывают через 10—12 дней по клинической картине и морфологическим показателям [8]. 1.8.1.2ИМУННОГИСТОХИМИЧЕСКИе МЕТОДЫ Для обнаружения антигена в патологическом материале используют иммуногистохимические тесты. Наиболее распространён метод иммунофлюоресценции (прямой, непрямой, с комплементом, ускоренный) и иммуноферментного анализа. С помощью таких методов исследования подвергают анализу ткани головного мозга подозреваемого в заболевании животного. Большие успехи достигаются при анализе биопсийного материала кожи, полученного из области укуса. Иммуногистохимические методы тесты позволяют антиген ВТБ через 2-4 дня с момента заражения (до появления первых клинических признаков) [23]. 1.8.1.3 БИОПРОБА Проводится на кроликах, белых мышах или хомяках, возрастом до 1 мес. Основной метод заражения лабораторных животных – интрацеребральный. Кроликов заражают в переднюю камеру глаза и внутримышечно, а мышей и хомяков – подкожно в области губы и передней части носа. Наблюдение за зараженными животными ведётся в течение 2-3,5 недель. При наличии ВТБ в инокулированном патологическом материале у заражённых животных в течение 5 дней развивается клиническая картина паралитической формы бешенства [23]. 1.8.1.4 ИЗОЛЯЦИЯ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК С этой целью применяют культуру клеток нейробластомы ССL131.Предварительная адаптация гена к данной перевиваемой линии клеток не требуется, но необходимо определение её чувствительности к местным циркулирующим штаммам ВТБ. Репродукцию вируса в культуре клеток устанавливают в реакции иммунофлюоресценции уже через 18 часов после заражения. По чувствительности метод соответствует биопробе на мышах, но результаты исследования получают в более короткие сроки [23]. 1.8.1.5 СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА Широкое распространение получает серодиагностика бешенства: РСК, реакция преципитации в агаровом геле, реакция нейтрализации, непрямой метод реакции иммунофлюоресценции, торможения гемагглютинации. Метод подавления иммунофлюоресценции. Сущность метода заключается в способности рабического антигена связываться с нефлуоресцирующими антителами и не входить вторично в соединение с ДАФИ. В препаратах с антигеном вируса бешенства свечения не должно быть, в обработанных только ДАФИ наблюдают специфическое свечение. РП (реакция преципитации). Сущность метода заключается в свойстве антигенов и антител диффундировать в агаровом геле и образовывать видимые визуально линии преципитации. Его можно применять при исследовании несвежего патматериала. В этой реакции от крупных животных исследуют отдельно кору полушарий мозга и аммоновы рога обеих сторон, мозжечок и продолговатый мозг, от мышей - весь мозг. Реакцию учитывают через 6,24,48 часов [23]. 1.8.2 ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЙ ДИАГНОЗ При остром менингите и энцефалите и других воспалительных процессах, протекающих в мозге и его оболочках, иногда также наблюдают сильное возбуждение и агрессивность. Но для бешенства характерно наряду с этими признаками появление параличей мускулатуры в определённом порядке. В отличие от бешенства, при эклампсии наблюдаются только общие судороги. Картину буйного бешенства могут стимулировать заболевания преджелудков, колики, гастриты, энтериты, мышечный ревматизм, паразиты в носовой полости, клещи в наружном слуховом проходе и др. Но при всех этих заболеваниях отсутствуют параличи. Инородные предметы в ротовой полости и глотке тоже вызывают беспокойство животных, слюнотечение, изменение голоса. При этом ротовая полость бывает открытой, как и при параличе нижней челюсти. Бешенство необходимо ещё отличать от паралича мускулатуры задних конечностей, внематочной беременности, некоторых острых инфекций. Болезнь Ауески характеризуется зудом, расчесами (кроме свиней), отсутствием агрессивности. При нервной форме чумы собак нередко наблюдаются признаки, сходные с клиническими симптомами бешенства, но отсутствуют паралич мышц нижней челюсти и резко выраженная агрессивность [10,11]. |
