Серологические исследования секрета молочной железы до отёла и молозива после отёла показали, что с приближением сроков родов происходит увеличение уровня антител к вирусу лейкоза в молозиве по сравнению с секретом в 2 – 4 раза в 88 % случаев и в 8 раз в 12 % случаев. Авторы рекомендуют учитывать колебания серологических реакций (РИД) в момент отёла при проведении диагностики заболевания и оздоровительных противолейкозных мероприятий.

Аналогичные результаты получены Мандыгрой Н. С. (1995). Согласно его исследованиям у всех коров резко снижается титр антител после отёла, а у 52 % реакция выпадает и восстанавливается только через 37 – 43 дня.

Таким образом, у глубокостельных коров наблюдается временное выпадение реакции иммунодиффузии в момент отёла, так называемая отрицательная серологическая фаза.

Однако, несмотря на вышеперечисленные недостатки иммунодиффузный тест диагностики лейкоза КРС является высоко чувствительным, экономичным и доступным для практики. Другие методы диагностики этого заболевания на современном уровне их разработки могут быть использованы при дополнительных исследованиях.

Применение метода гибридом антител (МКЛ) в и моноклональных биологических и медицинских исследованиях (Малоголовский С. А.,1997) изменило представления о структуре разных антигенов (в том числе вирусных) и антител, функции отдельных компонента вириона в развитии иммунных реакций, роли разных типов антител в нейтрализации вирусов.

Ученые, занимающиеся проблемами лейкоза КРС, оценили возможности, возникающие при использовании МКА, и взяли на вооружение биохимическигомогенные, направленные только против одной антигенной детерминанты, весьма стабильные по специфичности иммунные реагенты.

В большинстве случаев постоянным характерным признаком инфицированности животных ( особенно на ранней стадии болезни ) является наличие АТ к главному оболочечному гликопротеиду Ср 51, поэтому первые моноклональные антитела были получены именно к этому полипептиду. На основании полученных данных предложено использовать МКА для серологической диагностики лейкоза КРС.

Высокая чувствительность ИФА на основе МКА в отличии от РИД позволяет быстро и массово исследовать сыворотки, собранные у животных отдельного стада. С помощью данного метода можно выявлять стада, в которых уровень инфицированных не превышает 1%. Однако иммуноферментный анализ и реакция иммунодиффузии не способны дифференцировать материнские антитела у молодых животных от активных АТ, продуцирующих при вирусной инфекции. В этом случае высокая чувствительность ИФА с применением МКА может затруднять оценку нормы продолжительности колострального иммунитета, так как тест – ИФА позволяет выявлять материнские антитела в более поздние сроки, чем РИД.

Данные литературы свидетельствуют о том, что моноклональные антитела можно с успехом использовать для диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Однако на сегодняшний день реакция иммунодиффузии остаётся простейшим достаточно чувствительным диагностическим тестом, позволяющим быстро определить инфицированность стада. Для постановки же ИФА требуется дополнительное оборудование и навыки. Трудоёмкость процесса можно снизить, если заблаговременно иммобилизировать антитела на пластинке или заранее сенсибилизировать полистероловые планшеты не только моноклональными антителами, а и антигеном, который связан с этими МКА. [1]

Вследствие того, что часть инфицированных животных из – за низких титров антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота может остаться не обнаруженной при иммунологических методах исследования, крайне необходимы разработка и использование высокочувствительных методов выявления инфицированных животных, бессимптомного вирусоносительства как основного источника горизонтальной (контактной ) передачи и распространения возбудителя лейкоза.

Развитие биотехнологии привело к созданию диагностического метода определения инфекционных болезней, основанного на уникальности геномов возбудителей этих инфекций – полимеразной цепной реакции ( ПЦР ). В настоящее время ПЦР – наиболее чувствительный и спецефичный метод диагностики, с помощью которого можно определить единичные копии вируса в клеточном образце.

Полимеразная цепная реакция состоит из серии циклов, в каждом из них происходит удвоение числа тестируемых молекул ДНК. Сначала тестируемую молекулу ДНК при нагревании до 94 –95 С разделяют на две комплементарные цепи. При охлаждении до 50 – 60 С с цепями ДНК соединяются искусственные синтезированные специфические ДНК – олигонуклеотиды ( прайнеры ). При нагревании до 70 С термостабильная ДНК – полимераза достраивает цепи ДНК. Всё это происходит в каждом цикле, которые повторяются 20 – 30 раз. Инфекционная ДНК умножается до количества достаточного для определения её, например, методом электрофореза.

Метод полимеразной цепной реакции – надёжный и достоверный тест для раннего выявления инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных, его с успехом можно использовать для определения источника инфекции в стадах, при племпродаже, профилактике и на заключительных этапах искоренения ретровирусной инфекции. У животных с незначительно повышенными морфологическими показателями крови ПЦР позволяет достоверно отличать лейкемоидное состояние организма от ранней стадии лейкозного процесса.

Данный метод вследствие его высокой чувствительности. Чёткой воспроизводимости результатов и длительной сохранности клеточных препаратов, даёт возможность дальнейшего изучения этиологии и патогенеза лейкоза крупного рогатого скота [11].

1.6. Профилактика, меры оздоровления неблагополучных хозяйств

В борьбе с лейкозом крупного рогатого скота большое значение имеет комплекс профилактических мероприятий по обеспечению стойкого благополучия стад, свободных от заболевания. В его основу должно быть положено:

- точное знание эпизоотической ситуации по лейкозу в районе на основании данных различных исследований;

1.  разделение стада на три группы: свободные от инфекции, стадо со скрытым течением инфекции и неблагополучные по лейкозу;