Однако РИД также имеет свои недостатки (например, выпадение серологического ответа). Установлено, что среди инфицированных жи­вотных дойного стада постоянно имеются особи, сыворотка крови кото­рых отрицательно реагирует в РИД. Они служат скрытым источником инфекции в оздоравливаемом стаде [13].

Выпадение, серологической реакции затрудняет своевременное выяв­ление и изолирование источника инфекции и тем самым удлиняет сроки оздоровления неблагополучных по лейкозу стад. Многие отечественные и зарубежные исследователи объясняют выпадение серологической реак­ции передачей антител молозивом потомству. За 2-3 недели до и после отела у коров в сыворотке крови противовирусные антитела в РИД не обнаруживают. В этот период высокий титр антинел регистрируют в молозиве и молоке инфицированных коров.

Мурватуллаев С. А. (1994) пришел к заключению, что выпадение серологических реакций при лейкозе крупного рогатого скота часто встречается. Могут отсутствовать линии преципитации как к гликопротеидному, так и к полипептидному антигенам вируса лейкоза, причем первому из них линия преципитации часто восстанавливается, а спустя некоторое время может вновь исчезать. Линия к полипептидному -24 антигену вируса лейкоза не восстанавливается. Связи между выпадени­ем реакции и беременностью, отелом, сроком стельности не уста­новлено. Существует закономерность между уменьшением (увеличением) числа лейкоцитов и выпадением (восстановлением) серологического ответа больного лейкозом животного [13].

Частое выпадение серологической реакции у больного животного свидетельствует о необходимости сокращения сроков диагностического исследования в неблагополучных стадах с 90- до 30-45 дней для своевременного выявления и изолирования источника инфекции.

Согласно действующей инструкции, исследование сыворотки крови в РИД запрещено повторное ее переисследование при положительном ее результате.

Кроме РИД, были предложены и другие серологические реакции (реакция связывание комплемента, реакция иммуннофлюоресценции, реакция радиоиммуннопреципитации, реакция нейтрализации), но широкого приме­нения они не нашли [12].

ИФА – высокочувствительный диагностический тест. С его помощью выявляют антитела не только в сыворотке крови, но и в других биологических жидкостях (молоко). Это очень важно, так как этот метод позволяет оценить эпизоотическое состояние стада по пробе молока. Благодаря высокой чувствительности, быстрой постановке реакции этот современный метод можно использовать для выявления вирусоносительства на последних стадиях оздоровления неблагополучных стад [8].

В последние годы всё более широкое применение находят молекулярно-биологические исследования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод обладает высокой специфичностью и позволяет выявить инфицированных животных на более ранних стадиях заражения. ПЦР-диагностику нельзя пока рассматривать в качестве массового метода исследования при лейкозе, она может использоваться наряду с серологическими методами преимущественно в племенных хозяйствах на завершающей стадии оздоровления [14].

Посмертная диагностика лейкоза крупного рогатого скота состоит из гистологического исследования и патологоанатомического вскры­тия. Патологоанатомическая диагностика основана на обнаружении в кроветворных органах изменений, являющихся следствием избыточного разрастания ткани. Патологоанатомические изменения лейкозного ха­рактера регистрируют при вынужденном убое животных с клиническими признаками лейкоза. При гематологической стадии лейкоза патологоанатомические изменения у крупного рогатого скота устанавливают не у всех животных.

Наиболее частой формой лейкоза крупного рогатого скота являются лимфоидные лейкозы и лимфосаркомы (гематосаркомы). Ряд исследовате­лей описали миелоидные формы лейкоза и лимфогрануломатоз.

В соответствии с действующей инструкцией по профилактике и оздоровлению крупного рогатого скота от лейкоза диагноз на лейкоз считается установленным при наличии одного из таких показателей [7]:

1. Положительного результата серологического исследования по РИД;

2. Характерных патологоанатомических признаков заболевания;

3. Положительного результата гистологического исследования патологи­ческого материала.

Основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический - реакция иммуннодиффузии в агаровом геле. Гематологический и клинический методы исследования используются для установления стадии полного разви­тия заболевания у серопозитивных животных. Патологоанатомические исследования устанавливают степень поражения органов, а гистологи­ческим - морфологические формы лейкоза.

При выявлении у крупного рогатого скота изменений белой крови необходимо провести дифференциально-диагностические исследования, исходя из того, что подобные нарушения возможны при некоторых инфекционных и незаразных болезнях. Следует отметить, что дифференциальную диагностику легче осуществлять в тех хозяйствах, где ветеринарные специалисты вооружены многолетними знаниями эпизоотической ситуации и анамнестическими данными о характере преобладающих незаразных болезней крупного рогатого скота.

К числу хронических заразных болезней крупного рогатого скота, при которых наблюдаются изменения крови, требующие дифференциации с целью исключения лейкоза, относится туберкулез, паратуберкулезный энтерит, бруцеллез, актиномикоз, бабезиоз, фасциолез и др.

Дифференциация туберкулеза достигается прежде всего аллергическими, бактериологическими, серологическими (РИД) и патологоморфологическими исследованиями. При туберкулезе наблюдаются лей­коцитозы или лейкопении, сопровождающиеся нейтрофилией. При благо­приятном течении туберкулеза отмечают умеренный непродолжительный лимфоцитоз [7].

При бруцеллезе, сопровождающемся гнойно-некротическими процессами, регистрируют нейтрофилию со сдвигом лейкоцитарной форму­лы влево. Чаще всего у крупного рогатого скота протекает с нормаль­ными показателями белой крови. При дифференциальном диагнозе учи­тывают данные эпизоотологии и результаты серологических исследо­ваний на лейкоз и бруцеллез [7].

При паратуберкулезе могут наблюдаться лейкопении и лимфопении [7].

Актиномикоз исключают клиническим исследованием. Лимфоузлы (под­челюстные, в области глотки, гортани и реже вентральной части шеи) при актиномикозе характеризуются плотностью пораженной ткани, флюктуацией, абсцедированием с образованием фистулезных ходов на раз­резе [7].

Из незаразных заболеваний от лейкоза крупного рогатого скота следует дифференцировать маститы, пневмании, ретикулоперикардиты, эндометриты, болезни печени и прочие [7].

Хронические заболевания без гнойно-воспалителъных проявлений сопровождаются в большинстве случаев нормальными показателями периферической крови, иногда наблюдаются повышенные количества лейкоцитов и изменения в лейкоцитарной формуле с наличием эозинофилии, нейтрофилии или моноцитоза. В редких случаях при одновременном сочетании двух или более хронических заболеваний нелейкозной природы у животных может отмечаться умеренный лимфоцитоз при нормальном или повышенном количестве лейкоцитов [7].

Также лейкозы следует дифференцировать между собой: гемацитобластоз, миелолейкоз, лимфолейкоз, гематосаркомы, злокачественный гистиоцитоз, лимфосаркоматоз, ретикулосаркоматоз, лимфогранулематоз. Эти формы можно различать при исследовании мазков крови: лейкоцитарная формула и степень зрелости клеток переферической крови [7].